Испытуемые первоначально делали черную работу: мыли полы и работали на кухне, потом уже всем давалось послушание по их наклонностям и талантам. Почти все крестовые сестры проходили медицинские курсы и становились сестрами милосердия, имея возможность полноценно трудиться в госпитале. Для поддержания их профессионального уровня в обитель приглашались медики, которые читали сестрам лекции.
Все врачи работали в больнице Марфо-Мариинской обители бесплатно, тем не менее доктора были одни из лучших в Москве, и вскоре обительская больница считалась образцовой, сюда присылали тяжелых и безнадежных больных, которые, благодаря отличному уходу, выздоравливали. Если не считать раненых и туберкулезных больных, для которых были выстроены отдельные лазареты, в больнице обители был зафиксирован всего один смертельный исход.
С каждым годом сестер в обители становилось все больше, обитель стала известна не только в Москве, но по всей Российской империи, сюда стремились попасть на служение.
Обитель продолжала свою деятельность, насколько это было возможно, и после ареста великой княгини. Сестры продолжали лечить всех приходящих к ним, но в годы революции и гражданской войны находились в полной неизвестности. После того как в 1926 году Марфо-Мариинская обитель была расформирована большевиками, многие крестовые сестры попали в ссылку. Шестнадцать из них были отправлены в Киргизию, в Туркестан, откуда только через двадцать лет, в 1946 году, они смогли переселиться в с. Владычню Тверской области к духовнику обители, и уже не все.
По воспоминаниям м. Надежды (З.А. Бреннер), крестовые сестры Марфо-Мариинской обители старались и вне ее стен держаться по возможности вместе и следовать данным обетам служения людям. Так, например, она сама отказалась от помощи матери, которая хотела вернуть ее из ссылки, чтобы остаться со своими крестовыми сестрами в Туркестане. Удивительно, но жизненные трудности не разобщили столь разных по характерам, воспитанию, образованию и социальному происхождению женщин.
Говоря о Марфо-Мариинской обители милосердия, невозможно обойти вниманием духовника обители — о. Митрофана Сребрянского. Происходил он из священнической семьи, получил хорошее домашнее образование, затем начал учиться в семинарии. В 1897 году, уже будучи священником, стал настоятелем Покровского храма 51-ого Черниговского полка в г. Орле. Примечательно, что шефом полка была великая княгиня Елизавета Федоровна. Когда началась русско-японская война, о. Митрофан отправился с полком на Дальний Восток, где и находился до последних дней войны. Там он вел подробный дневник, который с его согласия публиковался почитателями Сребрянского.
Во время создания обители великая княгиня искала священников, которые могли бы помочь ей в устроении быта и поддержании нравственного облика ее подопечных. Рассмотрев несколько поданных на ее имя проектов, по которым могла бы развиваться обитель, Елизавета Федоровна приняла проект Митрофана Сребрянского и пригласила его в Москву. После раздумий он с женой переехал в строящуюся обитель и стал духовным отцом Марфо-Мариинских сестер.
Уже после революции в 1919 году он с супругой принял монашеский постриг. В 1923 году он был выслан в Тобольск, откуда вернулся через два года. После упразднения обители о. Митрофан переехал в с. Владычню к родственникам жены, где служил в храме и духовно окормлял верующих. Затем был сослан на Крайний Север, но был освобожден досрочно. Пережил Вторую мировую войну. Жители Владычни, которая, по сути, находилась на передовой и над которой летали немецкие боевые самолеты, за сохранность своих жизней и домов благодарили о. Митрофана, как доброго молитвенника.
Умер он в 1948 году и был похоронен на местном кладбище, там и покоились его мощи вплоть до 2000 года, когда произошла канонизация арх. Сергия (Митрофана Сребрянского). Ныне его мощи находятся в Тверском Воскресенском кафедральном соборе.
Марфо-Мариинская обитель, объединившая людей различных сословий — от великой княгини до крестьянок инородного происхождения, за недолгий период своего существования в начале ХХ века дала православному миру четверых святых — великую княгиню Елизавету Федоровну, с. Варвару (Яковлеву), арх. Сергия (Сребрянского) и с. Евдокию (Кузьминову).